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生物打印中的GelMA溶胶配置及SMC细胞培养

更新时间: 2024-12-30 16:03:00  查看次数: 46    
GelMA溶胶的配置方法。实验室之前对不同浓度的 GelMA 凝胶培养细胞的活性做了初步研究,发现浓度为 5%的 GelMA 溶胶里细胞成活率比较高,所以后面试验就都用 5%浓度的 GelMA 溶胶啦。以配置 5 毫升 5%浓度的 GelMA 溶胶为例,步骤是这样的:在通风的地方,拿一个干净的 10 毫升离心管,用 1 毫升的移液枪吸 5 毫升 D - PBS 溶液放到离心管里。再用 50 微升的移液枪从这 5 毫升 D - PBS 溶液里吸出 25 微升。接着用 50 微升移液枪吸 25 微升 200×5 酚红溶液加到 D - PBS 溶液里。关上通风橱的风机,打开天平并归零,称出 0.25 克 GelMA,把它碾碎后放到有 D - PBS 的离心管里。把这个离心管放在水浴锅里,打开 50℃的恒温水浴锅,加热 5 个小时。5 小时后把离心管拿出来,用吸管吸 1 摩尔/升的 NaOH 溶液,一滴一滴地加到离心管里,加到溶液刚好从黄色变成红色但还没变成紫色就行。然后往离心管里加 0.005 克的 LAP 光引发剂,大概 10 分钟 LAP 就会完全溶解。再用 TDZ4 - WS 台式低速离心机,转速设成 4000 转每分钟,把配好的溶液离心 5 分钟。离心完后,用水浴锅把离心管加热到 50℃,接着用 0.2 微米的过滤器过滤,把过滤好的溶液放到试管或者注射器里,用锡箔纸包好,放在 4℃的冰箱里保存。
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SMC细胞。这个课题选的是人脐动脉血管平滑肌细胞,也就是 SMC 细胞。SMC 细胞在人体很多地方都有,像血管、呼吸道、胃肠道、生殖系统和泌尿系统等等。这次课题用的 SMC 细胞是从实验室液氮罐里保存的第 4 代 SMC 细胞来的,用特定的培养基培养,就能繁殖出大量实验要用的细胞。SMC 细胞相互连接能形成中空的组织和器官组织,还能收缩舒张,就算受到外力变形了也能变回原来的样子。